细胞铺板的实验步骤
六孔板铺板技巧?
六孔板铺板技巧?
6孔板,采用将第一个孔加入少量无血清生物试剂,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多,而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放丝杆静置一下。
这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。
也可以采用轻拍的,但力度没有96孔板好掌握,效果没有96孔板好,所以我放弃改用浸润孔底的方法。
六孔板细胞铺板怎么摇匀?
六孔板铺板在摇匀时千万不要只沿着一个方向做圆周运动,要十字交叉摇,即前后晃几下,左右晃几下,这样细胞才不至于集中在孔中央和省委。
质粒扩增的步骤和意义?
步骤
细菌和寄生虫铺板:让各种病菌在LB培养基上生长,耗材上为了防止杂菌生长,会加入抗癫痫药物,而含有目标质粒的细菌和病毒带有激素类药物的抗性,能够正常生长,从而保证绳子上长出来的会是目标菌落。
挑选菌落:从LB培养基上挑选菌落备用
微生物学():将挑好的菌落放到流感病毒培养液当中,并于37摄氏度干燥箱中以250rar摇动8~12h,使白色念珠菌繁殖
裂解抽提:采用细胞裂解的,从含目标质粒的结核杆菌菌液中将质粒提取出来。
用途介绍
这一实验主要用于获取较多的质粒,质粒扩增需要的源头质粒量非常小,1微克的质粒都已经能够满足扩增的需要,这也使得质粒的使用和赠送变得非常容易。质粒的用途往往是用于转染细胞,通过转染的让细胞表达质粒中携带的基因,从而研究该基因对应蛋白等的性能。在基础细胞生物学研究中起着非常重要的作用。
用途介绍
这一实验主要用于获取较多的质粒,质粒扩增需要的源头质粒量非常小,1微克的质粒都已经能够满足扩增的需要,这也使得质粒的使用和赠送变得非常容易。质粒的用途往往是用于转染细胞,通过转染的让细胞表达质粒中携带的基因,从而研究该基因对应蛋白质的的性能。在基础细胞生物学研究中起着非常重要的作用。
六孔板怎么铺均匀?
楼主,铺板的均匀有两种,一种是孔间的均匀,一种是孔内的均匀。为了做到孔间的均匀,建议楼主采用多通道移液器(有人叫排枪),配合相对应的加样槽。每孔逐一添加非常难以作到均匀。关于孔内的均匀我没有什么秘诀,经验是细胞悬液加入后不要晃动或敲打板,而是直接放入孵育箱让它自己贴壁。