dna提取中获取上清液的方法
![dna提取中获取上清液的方法 DNase污染如何消除? dna提取中获取上清液的方法 DNase污染如何消除?](http://www.enzenilongjian.com/uploads/20230307/2276d6325bc8ab6bd54f4febd098ac48.png)
DNase污染如何消除?
DNase污染如何消除?
方法:
1.在37度恒温下用DNAs
DNA标本制作方法?
1收集材料。这种方法需要聚苯乙烯泡沫球、针线、颜料和牙签。
2给珠子上色。选择六种颜色代表糖、磷酸和四种碱。你可以随意选择。你需要画16 糖和糖,14 磷酸 和4个彩球(代表胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和腺嘌呤)。一个球可以选择白色,所以不需要涂。你不 不要用油漆球糖 ,节省了很多时间。
3搭配好碱基。等颜料干了之后,再把各个底的颜色排列好,搭配起来。胞嘧啶和鸟嘌呤,胸腺嘧啶和腺嘌呤必须分别是一对。颜色的顺序不重要,只要搭配好就行。配对的球用牙签从中间穿过,两端留有空隙,然后就可以插入DNA链了。
4做一个双螺旋。用针线缝15个线团,一端打结,另一端穿过珠子。 糖 球和 磷酸 球相邻地放在一起,从而形成15个球长的DNA链。这里的糖比磷酸多。确保两条长DNA链的糖和磷酸处于相同的顺序。将一根线穿过一个糖和磷酸的球,并系住一端以防止球掉落。
5将碱基对放在长链上。在两个糖球上插一串牙签。只能插入糖里,这是DNA的现实。确保牙签插入牢固,这样它不会 不容易掉下来。
6扭曲DNA链。插入所有牙签后,逆时针扭转DNA长链,模仿经典的DNA双螺旋结构。你 我们完成了!
如何提取DNA粗提和精提的方法?
首先,DNA提取(粗提取)
1.酚提取法:先用酶K和SDS破碎细胞,然后消化蛋白,再用大小为100-150kb的酚和酚氯DNA。
2.甲酰胺解聚法:如上破碎细胞,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合体,再透析获得DNA,获得约200 KB的DNA。
3.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解液铺在乙醇上,然后用钩状或U形玻璃棒在界面处轻轻搅拌,DNA沉淀缠绕在玻璃棒上。产生的DNA约为80kb。
4.异丙醇沉淀法:与第一种方法基本相同,只是用2倍体积的异丙醇代替乙醇,可以去除小分子RNA(溶于异丙醇)。
5.表面活性剂的快速制备方法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或苯酚去除蛋白质,用乙醇沉淀或透析。
6.加热法快速制备:96℃加热在-100℃保温五分钟,然后离心后取上清液,可用于PCR反应。
7.碱变性快速制备:先用NaOH 20分钟,再加入HCI中和,离心后取上清液,含少量DNA。
二、DNA的浓缩(精制提取)
1.固体聚乙二醇(PEG)的浓缩:用透析袋将PEG加至适量。
2.丁醇提取和浓缩:DNA溶液中的水可以分配到正丁醇或仲丁醇中,而DNA不会。因此,重复几次可以显著减少DNA体积。
3.乙醇或异丙醇沉淀:(1)需要阳离子盐,NaAc最常用,NaCl对含SDS的样品好,NH4Ac对去除dNTP好。PiCl能很好地沉淀RNA,但在逆转录前不能使用。(2)沉淀温度和时间;0℃-4℃,12000g,10分钟,小于100 BP的DNA需要超速离心。
4.精胺沉淀法:与DNA结合后,DNA结构凝聚沉淀,需要在无盐或低盐溶液中。