elisa都需要包被么

elisa都需要包被么 ELISA包被蛋白质的原理?

ELISA包被蛋白质的原理?

ELISA包被蛋白质的原理?

包衣板上的成分具有很强的阴离子吸附功能,包衣液的PH值为9.6,可以使被包衣蛋白呈碱性,因此可以牢固地吸附在包衣孔中。

请教ELISA中样品稀释液为什么要加入Tween20,原理是什么?

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ELISA的基本过程是?

1.包衣过程(注意设置空白对照和阴性对照):。

将用过的抗原用包被稀释液稀释至适当浓度(一般要求抗原包被量为每孔20-200μg),每孔加入100μl抗原,将孔内液体在37℃放置4h或4℃放置24h。(为避免蒸发,应盖上平板或将其平放在金属湿盒中,底部铺上湿纱布。)

2.关闭酶标反应孔:。

5%小牛血清在37℃密封40分钟。在密封期间,所有反应孔都填充有密封液,并且每个孔中的气泡都被去除。密封后,用洗涤液洗涤孔3分钟。

洗涤方法::吸干孔中的反应液,用洗涤液充满板孔,静置2min,轻轻摇动,吸干孔中的液体,倒出液体,拭于吸水纸上。洗涤3次

3.加入待测样品(建立合适的浓度梯度):。

一般用1 : 50-1 : 400的稀释液进行检测,要用大的稀释体积,一般保证gt20μl l的样品吸收.

将稀释后的样品加入酶标反应孔中,每个样品至少加入两个孔,每个孔100μl,在37℃放置40-60min。用洗涤液冲洗3次,每次3分钟。

4.加入酶标抗体:。

酶标抗体:按酶标物供应商提供的参考稀释度进行,37℃,30-60分钟。当短于30分钟时,结果往往不稳定。向每个孔中加入100μl。像以前一样洗。

5.加入底物溶液(现在用):)

TMB-尿素过氧化氢溶液是首选,其次是OPD-过氧化氢底物溶液系统。

底物加入量为:每孔100μl,将底物置于37℃暗处3-5分钟,加入终止液显色。

6.停止反应,:

向每个孔中加入50μl终止液以终止反应,并在20分钟内测量。实验结果