石蜡切片作用 石蜡切片的原理和基本步骤？

石蜡切片作用

石蜡切片的原理和基本步骤？

石蜡切片的原理和基本步骤？

1.固定:

将新鲜组织切成小块，并在4%多聚甲醛中固定过夜。将组织中的物质成分固化，尽可能保持其在体内的结构。同时可以使组织变硬，有利于切片。

2.脱水:

为了减少组织材料的急剧收缩，应采用从低浓度到高浓度的顺序通过70%、85%和95%直至纯酒精(无水乙醇)，每次1小时。定色的组织材料需要去除留在组织中的定色液及其晶体沉淀，否则会影响后期的染色效果。

3.透明度:

常用的透明剂是二甲苯，是石蜡的溶剂。纯酒精不溶于石蜡，需要用可溶于酒精和石蜡的溶剂替换组织中的酒精。在透明剂的浸渍过程中，材料块被认为是透明的。

4.浸蜡:

首先，将组织材料块浸入熔融石蜡和二甲苯的等量混合物中1小时。连续移入两种熔融石蜡溶液中，浸泡约1小时。

5.嵌入:

盒底用少许热蜡液快速贴在包埋盒上，然后放在速冻台上固定石蜡。

6.切片:

切片刀的锋利程度和蜡块的硬度直接影响切片的质量。蜡块的硬度可以通过放入冷水中来改变。通常切片厚度为3-5um，用刷子轻托，放入37度水浴中使切片显影。

7.修补和烘烤:

一般用恒温水浴锅，温度控制在37-40℃左右，有利于石蜡切片的发育。贴好的切片在60℃的恒温箱中干燥2小时，待蛋白凝固后即可染色。

8.切片脱蜡和水合:

将干燥的切片在二甲苯中脱蜡，然后用纯乙醇(浓度从高到低依次为95%、85%和70 %)水合。

9.染色:

经典苏木精和伊红:细胞核被苏木精染成紫蓝色，大部分细胞质和非细胞成分被伊红染成粉红色。实验操作简单。

免疫组织化学:指在组织细胞中原位通过抗原抗体反应和组织化学显色反应，用显色剂标记的特异性抗体。