凝胶电泳步骤
什么是凝胶电泳的方法？
什么是凝胶电泳的方法？
一。操作步骤:1。电泳方法的一般核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳；如果需要高分辨率的电泳，尤其是只有几个bp的区别，应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；脉冲凝胶电泳应用于不适合普通电泳的巨大DNA链。对琼脂糖凝胶电泳而言，凝胶浓度一般为0。.5～2\\%间，低浓度用于大片段核酸电泳，高浓度用于小片段分析。低浓度胶容易破碎，小心操作和使用优质琼脂糖是解决办法。缓冲液常用的缓冲液有TAE和TAE。TBE，而TBE比TAE具有较好的缓冲能力。使用新的缓冲液进行电泳，可显著提高电泳效果。电压和温度电泳时，电场强度不应超过200。V/cm，电泳的温度应低于30℃，对DNA电泳而言，温度应低于15。℃。5、DNA样品的纯度和状态要注意样品中盐含量过高，杂质蛋白含量过高，会导致条带模糊和条带缺失。酒精沉淀能去除多余的盐，用酚能去除蛋白质。6、DNA正确的DNA上样量是条带清晰的保证。请注意，过多的DNA样本可能会导致DNA带型模糊，而过小的DNA样本则会导致信号较弱甚至缺失。7、MarkerDNA电泳的选择必须使用DNA Marker或者已知大小正对照DNA来估计DNA片段的大小。Marker在目标片段大小附近应选择ladder密集型，以便对目标片段大小的估计更加准确。溴化乙锭是凝胶染色和观察实验室常用的核酸染色剂。（EB），染色效果好，操作方便，但稳定性差，有毒。注意凝胶的观察，根据染料使用合适的光源，刺激波长。如果刺激波长不正确，条带就不容易观察，导致条带模糊。注意事项：1、使用普通电泳的巨大DNA链可能无法跑出胶孔，造成缺带。高浓度的胶水会使分子大小相近的DNA带难以区分，导致条带缺失。电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH随着价值的上升，缓冲性能的下降，DNA电泳可能会出现条带模糊、不规则的DNA带迁移现象。如果电泳时电压和温度过高，就会出现条带模糊、DNA带不规则迁移的现象。尤其电压过大可能导致小片段跑出胶水而出现缺带现象。变性DNA样品可引起条带模糊和缺失，也可引起不规则DNA条带迁移。取样前不要加热DNA样品，使用20。mM NaCl阻止DNA变性的缓冲液稀释。过多的DNA样本量可能会导致DNA带型模糊，而过小的DNA样本量则会导致带信号减弱甚至缺失。