石蜡包埋技术
oct包埋与石蜡包埋区别？
第一法蜡型包埋步骤及操作要点？
oct包埋(冰冻切片)与石蜡包埋区别如下：
一、oct包埋对组织的抗原性保留较好，但形态保留较差，一般用于原位杂交ISH，免疫荧光IF。冰冻切片一般厚度8~15μm。冰冻包埋步骤相对简单。固定后，直接用镊子将样品放在样品支架上，挤压OCT完全包装组织，放入冰箱等待OCT凝固即可。固化后可直接切片。如果切片不及时，用锡箔纸包装，放入-80℃存放。
二、石蜡包埋，一般用于HE染色或免疫组织化学IHC。厚度较薄，一般为4um，工艺复杂，样品的质量取决于不同组织的类型和组成。它更多地取决于制造商的经验。为了获得最佳的实验条件，需要在实验过程中不断优化。
第一法蜡型包埋步骤及操作要点？
包埋步骤
1组织脱水、渗透和包埋
○1脱水：
50\\% 乙醇（90min）→70\\% 乙醇（90min）→85\\%乙醇(90min) →95\\%乙醇(90min)→100\\%乙醇(60min)→100\\%乙醇(60min)。
注：○1如果组织数量过多，应分开脱水(约20个组织)
○2组织提到的脱水体积至少为4倍
○3当乙醇纯度较高时，脱水时间会减少，否则会导致组织过硬
○4最好搅拌，使脱水充分
○2透明：
1/2乙醇 1/2→二甲苯→二甲苯，每一步60min。
注意:二甲苯的时间不宜过短或过长。时间太短导致透明度不足，影响后部渗透和埋藏；时间太长会导致组织变脆。
○3渗透：
1/2二甲苯 1/2石蜡:min)→石蜡I (120min)→石蜡II(120min),62℃。
注意:如果从脱水到渗透的时间过长，可以在1/2二甲苯 1/2石蜡或石蜡I的步骤中停止，进入1/2二甲苯 1/2石蜡或石蜡I后立即冷却，将组织密封在里面，第二天再融化；第二天融化时温度不应超过65℃，并且需要在完全溶解算时间，直到完全溶解。
○4包埋：
将组织放入装有石蜡的模具中，摆好位置，在石蜡包埋机的冷台上冷却。
注意：包埋时，不要用手按压石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍然比较软。
2 切片和贴片
在切片机中约5处埋设的组织块μm，在漂白机中展开，然后将切片捞在多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。