荧光探针技术的原理
dna荧光探针的设计原理?
dna荧光探针的设计原理?
先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链,然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物,即左右引物。此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片段,一般需20-30个碱基对,过少则难保持与DNA单链的结合。
引物与互补DNA结合后,以靶DNA单链为模板,经反链杂交复性(退火),在Taq DNA聚合酶的作用下以4种三磷酸脱氧核苷(dNTP)为原料按5到3方向将引物延伸、自动合成新的DNA链、使DNA重新复制成双链。然后又开始第二次循环扩增。引物在反应中不仅起引导作用,而且起着特异性的限制扩增DNA片段范围大小的作用。新合成的DNA链含有引物的互补序列,并又可作为下一轮聚合反应的模板。如此重复上述DNA模板加热变性双链解开—引物退火复性—在DNA聚合酶作用下的引物延伸的循环过程,使每次循环延伸的模板又增加1倍,亦即扩增DNA产物增加1倍,经反复循环,使靶DNA片段指数性扩增。
pcr探针法原理?
其原理为:光照射到某些原子时,光的能量使原子核周围的一些电子由原来的轨道跃迁到了能量更高的轨道,即从基态跃迁到第一激发单线态或第二激发单线态等。
第一激发单线态或第二激发单线态等是不稳定的,所以会恢复基态,当电子由第一激发单线态恢复到基态时,能量会以光的形式释放,所以产生荧光。
溶酶体探针实验原理?
溶酶体为单层膜蛋白包围的内含一系列酸性水解酶的小体。溶酶体中含有多种酶,如糖苷酶、酸性磷酸酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶等等,是物质代谢的场所。
弱碱性胺选择性聚集在胞内低pH值的小室中,可用于研究溶酶体的生物合成和发病机理。其中最常用的就是DAMP,它不发荧光,需要和抗DNP的抗体共同使用,来观察染色模式。中性红、吖啶橙等荧光探针也常用于酸性细胞器的染色,不过它们缺乏特异性。
基因探针,放射性同位素示踪法,荧光物质标记法的原理分别是什么?他们有什么区别?
基因探针说的是一种手段,而另外两个说的是2种技术方法。基因探针,就是用一段互补的DNA去和以打开为单链的目的DNA杂交,看有无目的序列。这个探针,既可以用放射性同位素标记(比如用32P标记的碱基取代正常的碱基),也可以用荧光标记(共价修饰)。这样探针结合后,洗掉未结合的多余探针,就可以通过放射自显影,或者荧光成像的方法来观察了。
同位素示踪,和荧光标记可应用的领域很多,只要目标分子可以被标记,就可以使用,常见的比如标记抗体(流式细胞仪就是用荧光标记的抗体),标记酶的底物,器官代谢物(临床上的肾图)等等。