高效液相色谱仪使用方法原理步骤
液态色谱仪使用方法？
液态色谱仪使用方法？
液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱及液-固色谱。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有高效、快速、灵敏等特点。
液相色谱仪操作过程
1、开机操作：
①打开液相色谱仪电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server(一般启动时已打开);
②自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时(有六行字符)，打开工作站(先打开Online);
③打开冲洗泵头的10异丙醇溶液的开关(需用针捅抽)，控制流量大小，以能流出的Z小流量为准;
④注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于Zdi限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液;
⑤使用过程中要经常观察液相色谱仪工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间(如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相)，正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命。
3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果。
4、使用液相色谱仪手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡。
5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5稀硝酸溶液浸泡后再洗涤。
6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯。
7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，Z后自下而上关闭液相色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关。
8、使用者须认真履行液相色谱仪使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。
液相色谱仪操作注意事项
1、液相色谱仪操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。当出现错误警告(各组件指示灯均为红色)，一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击Online操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
2、连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，Z好不要混用，必要时可使用PEEK管及活动接头。
3、液相色谱仪操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法(新柱不提倡)，若还是无法通畅，则需换柱。
4、运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完。
5、样品瓶中样品较少，自动进样器进样针无法到达液面，可采用调低进样针进样高度的办法，注意设置时不要使进样针碰到瓶底，微量样品分析应使用微量样品瓶。
6、液相色谱仪自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对准时，需重新定位。
7、泵压不稳或流量不准，可能为柱塞杆密封圈问题或seal wash垫圈问题，需更换。
8、基线产生不规则噪声，可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡(使其平衡，若用离子对试剂，在首次使用使需要足够的时间和溶剂体积，色谱柱才能达到足够的平衡)，流动相被污染(更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统)，色谱柱被污染(为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱)，检测器不稳定。
9、短期有规则的噪声，可能原因为泵压不稳或泵脉冲，调节溶剂不适当(如两种溶剂的互溶性问题)，泵入口管路松或堵塞，泵太脏，泵柱塞磨损，检测器不稳定。
10、长期有规则噪声，可能原因为室温不稳(未使用柱温箱)或使用柱温箱不当。
11、基线漂移，可能原因为系统不稳或没有达到化学平衡，室温不稳(未使用柱温箱)，流动相污染或分解，柱污染，检测池泄漏，系统泄漏，固定相流失(另选流动相，另选色谱柱)，测定的波长选择错误(对溶剂有吸收)，样品组分保留太长(用强度合适的溶剂清洗色谱柱)，检测器不稳定。
12、液相色谱仪每次进样时的保留时间不重复，可能原因为系统不稳或未达到化学平衡，由于气泡、各部件磨损等原因引起的泵压或泵脉冲输液不稳定，进样体积太大或样品浓度太高平衡被破坏，溶剂配比不合适，柱被污染。
13、无峰，可能原因为液相色谱仪检测器选择错误，使用错误的流动相，样品降解;
14、色谱峰比预计的小，可能原因为进样体积错误，检测器灯故障，进样问题(瓶号错、进样体积不合适、进样错误、针头堵塞)。
15、峰变宽，可能原因为液相色谱仪进样体积太大或样品浓度太高，过滤器、保护柱入口、柱入口或连接管路有部分堵塞，检测器时间常数设置错误，进样器问题(如阀漏、针头堵塞或损坏)，柱或保护柱被污染，对流动相来说样品溶剂太强，使用错误的色谱柱，温度变化。
16、出现双峰/肩峰，可能原因为保护柱或柱入口部分阻塞，柱或保护柱被污染，柱性能下降，保护柱失效，进样体积太大或样品浓度太高(样品过载)，平衡破坏。
17、前沿峰，可能原因为进样体积太大或样品浓度太高(样品过载)，平衡破坏，对于流动相来说样品溶剂非极性太强(对于反相柱)，柱或保护柱被污染，柱性能下降，保护柱失效;
18、脱尾峰，可能原因为柱或保护柱被污染，柱性能下降，保护柱失效，液相色谱仪进样器问题(如阀漏等)，检测器时间常数设置错误。
19、出现鬼峰，可能原因为流动相被污染，样品预处理时产生降解或混入杂质，先前进样的流出物，样品定量管清洗不当，注射器脏，柱被污染，进样装置被污染，流动相中含有稳定剂/稳定剂变化。
高效液相色谱法分离的基本原理？
1、高效液相色谱法的原理是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测。
2、高效液相色谱法有“四高一广”的特点：
（1）高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
（2）高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
（3）高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
（4）高灵敏度：紫外检测器可达0。01ng，进样量在μL数量级。
（5）应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。