提取大肠杆菌中的质粒方法
目的基因的检测与鉴定的方法？
目的基因的检测与鉴定的方法？
目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。
以上步骤完成后，在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组D NA分子的受体细胞是很少的。因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。
大肠杆菌有多少质粒？
大肠杆菌的天然质粒有ColE1、RSF2124、pSC101。第一个质粒有大肠杆菌素E1合成基因；第二个是第一个的派生质粒，带有一个编码氨苄青霉素抗性基因的转位子；第三个有四环素抗性基因
质粒的大小一般在10kb左右,但是F 因子要大很多.是一个约 100kb 的质粒.它编码60多种参与复制、分配和接合过程的蛋白质（Willetts and Skurray,1987）.虽然F因子通常以双链闭环DNA（1-2个拷贝/细胞）的形式存在,但它可以在大肠杆菌染色体中至少30个位点处进行随机整合（Low,1987）.携带F因子的细胞,或以游离状态或以整合状态表达三根发样状的F菌毛.F
菌毛为供体与受体细胞之间产生性接触所必需.
质粒提取的注意事项？
1、利用氯霉素抑制染色体的复制，而不抑制质粒的复制这一特点，在低拷贝质粒（如pUC19）的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。
2、RNA 的去除，首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高浓度的 RNase A (100ug/ml)，或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的质粒，都可以降低 RNA 残留，但都不能彻底去除。
3、蛋白质的去除，主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间，可以形成更多的该不溶复合物，从而使蛋白质残留更少，但实践证明这样做并不是必须的，除非是大量抽提。 首先，质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取，可以根据实验的不同需求，选择相应的试剂盒。 质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取，获得的质粒可以用于常规的载体构建，一般适用于5ml以下菌液。 而质粒中提，在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素，获得的质粒可以用于细胞转染，常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同，可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。