革兰氏染色法最关键的步骤是什么
格兰仕染色剂怎么染色？
格兰仕染色剂怎么染色？
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红梁色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。注意：来自不同厂家的试剂盒，各个步骤的时间不一定一样，查看说明书和参照以往染色的经验，可以获得染色效果更好的染片。
革兰氏染色原理及步骤？
革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难区别。
经染色后，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。染色原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇脱色。
革兰氏染色最重要的一步为什么？
脱色。
乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节：脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。
因而脱色时间一般为20-30s。革兰氏染色法，是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法，属于复染法。
这种染色法是由丹麦医生革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷伯肺炎菌。革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。
染色原理：通过初染和媒染后，细胞内形成了不溶于水的结晶紫一碘大分子复合物。
革兰氏阳性细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高和其分子交联度较紧密，故在用乙醇洗脱时，肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩，加上它基本不含类脂，故乙醇处理不能在壁上溶出缝隙。
因此，结晶紫与碘复合物仍牢牢阻留在细胞壁内，使其呈现紫色。而革兰氏阴性细菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交联松散，故遇乙醇后，肽聚糖网孔不易收缩，加上它类脂含量高，所以当乙醇把类脂溶解后，在细胞壁上就会出现较大缝隙，复合物容易溶出细胞壁，因此通过乙醇脱色后，细胞又成无色。
这时再用红色染料进行复染，革兰氏阴性细菌将获得一层新的颜色——红色，而革兰氏阳性菌则仍呈紫色。