ncbi如何查询全部序列 NCBI中primer-blast使用方法？

ncbi如何查询全部序列

NCBI中primer-blast使用方法？

NCBI中primer-blast使用方法？

NCBI中primer-blast使用方法？
Q-PCR是生物学研究中的一项重要技术，用以检测基因表达的变化。其原料之一引物是需要研究者根据自己的研究对象进行设计的，这里介绍在NCBI里设计Q-PCR引物的方法。
1、首先打开NCBI，选择“Nucleotide”，并在搜索框输入基因名。一般用目标基因的突变体1去设计引物，也就是要选择目标基因的“transcript variant 1, mRNA ”,没有1就用2、3，以此类推。因为是Q-PCR，所以要去掉内含子，因此用mRNA。
2、从上一个页面点击FASTA，可以看到mRNA的序列。
3、搜索“NCBI BLAST”并点击进入，可以看到如下界面，往下拉。
4、点击进入Primer-BLAST
5、从第二步的页面复制序列或者序列号，粘贴在第一个框里。修改产物长度，即“PCR product size”,一般为100-200之间最好。还要选择“Exon junction span”为“primer must span an exon-exon junction”,这是为了排除DNA污染。其它的参数都可以不改。
6、把网页往下拉到底，点击左下角的“Get Primers”，耐心等待几分钟，网页就会弹出设计好的引物。
7、最后一步就是选择引物了。要选择自我配对和互相配对度低，产物长度尽量小的等等。需要指出的是，要注意看引物对非目标基因的检测潜力，如果它对于目标基因相似基因扩出的产物长度与目标产物长度一样长，这个引物的非特异性就很强，不能要。

如何找到细菌的基因组注释？

你输入这个细菌的名字直接查，一般会有的~~~~~而且一般第一个会是全基因组序列~~~
进入ncbi的首页，database选nucleotide，输入你的关键词,如果库里收录里就会有的

Retun是什么意思？

Reference Seq 其实是NCBI下的一个算作子库一样的数据库，包括基因组DNA，转录组，蛋白组数据，说白了是经过人工校验过的数据库，一般比较真实可靠且不冗余，你可能也发现了在NCBI中一个基因会有多个版本，但是经过校正进入RefSeq的一个基因一般只有一个序列 当然转录本一般不止一条，要是查询比对什么的用这个库比较靠谱，详见生物信息的书吧