pcr获得目的基因设计引物的依据

pcr为什么只扩增引物序列?

pcr为什么只扩增引物序列?

扩增序列应该称为目的基因,目的基因一般都上万bp,从两头开始当然不合适。PCR扩增只能扩增出上下游引物之间的序列,因为只有引物之间的DNA双链是解链状态的。
严格上讲,并不全是两个引物之间的序列。
例如,在第一个PCR反应循环时,扩增出来的是比两个引物之间序列更长,但又不是全长序列的片段。
但在后续扩增循环时,两个引物之间的序列的产量会越来越多。

设计简单的引物;如何通过PCR获得目的基因?

获取目的基因,要知道转录版本全长,然后设计上下游引物。
检测目的基因表达,只要设计上下游引物,扩增基因的100--200个碱基就可以了。
或者你的提问本身有问题,基因碱基是互补的,知道一条,就可以设计上下游引物。

DNA的复制过程中引物从哪里来?

1、如果是细胞内复制,引物就是细胞内合成的一段RNA
因为RNA聚合酶能从头开始合成,而DNA聚合酶不能从头合成.
2、如果是PCR,引物是我们加进去的DNA单链.
DNA在细胞内复制时,需要RNA引物,DNA复制开始时,DNA螺旋酶首先在复制起点处将双链DNA解开,通过转录激活合成的RNA分子也起分离两条DNA链的作用,然后单链DNA结合蛋白质结合在被解开的链上。引发体可以在单链DNA上移动,在dnaB亚基的作用下识别DNA复制起点位置。

pcr技术扩增目的基因的原理和条件?

PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):
模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍