荧光猝灭现象是由什么引起的
什么叫淬灭气？
什么叫淬灭气？
荧光猝灭（fluorescence quenching） 指激发态的荧光分子通过各种外转换过程失去能量使荧光强度降低的现象。由于该荧光物质以外的其他物质的存在使其荧光猝灭，则该物质称为猝灭剂，猝灭气体（quenching gas ）是指能诱导荧光猝灭的气体
紫外吸收剂和猝灭剂的区别？
紫外线吸收作用，紫外线吸收剂对紫外线有强烈的吸收作用，它们能选择性地吸收对高分子有害的紫外线，并将它的能量转变成对高分子无害的振动能或次级辐射荧光释放出来，从而使高分子免遭破坏。
猝灭作用，猝灭剂的作用机理与紫外线吸收剂不同，它并没有很强的吸收紫外线的能力，而是通过分子间的作用消散能量。镍的螯合物是一类很好的猝灭剂。
哪些因素会影响荧光波长和强度？
温度：溶液温度降低时，荧光效率增加，荧光强度增加。
●pH值：当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大的影响；FITC在酸性溶液中荧光强度显著降低。
●荧光染料的浓度：当荧光物质浓度高时会发生自熄灭现象。
要使荧光强度与荧光物质的浓度成正比，应使荧光物质的浓度足够高×。
●溶剂：乙醇溶剂中的荧光杂质会影响测定，需处理。
●增强剂：会加快染色速度，但对着色效果没有影响。
磷光原理？
原理
某些物质的分子在被光激发至较高的单线电子激发态的能级，并通过无辐射跃迁降落至单线第一电子激发态的最低振动能级后，激发态电子发生自旋翻转，转入亚稳的三重线电子激发态。这些激发分子在三重线态稍事逗留后又降落至单线电子基态。
在这一过程中又发生电子自旋翻转，并以光的形式释放出能量，此时发出的光称为磷光。这些激发分子在三重线态停留的时间一般在10-3 秒至几秒，磷光产生过程时间较荧光长几个数量级。如以肉眼观察，一旦激发光被截断，荧光立即消失，而磷光还会延续一段时间。激发分子在三重线态停留期间，易与溶剂分子碰撞而去活化，或被顺磁类物质猝灭，导致室温下流体质中的磷光减弱或消灭，所以磷光通常在液氮温度下，在透明的刚性玻璃体中测量。
荧光熄灭剂，原理？
引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂（quenching medium）。主要有卤素离子，重金属离子，氧分子，含硝基，重氮，羰基和羧基的化合物等。
荧光熄灭的原因很多，机制也很复杂，主要类型包括： ①因荧光物质的分子和熄灭剂分子碰撞而损失能量；②荧光物质的分子与熄灭剂分子作用生成了本身不发光的配位化合物；③溶解氧的存在，使荧光物质氧化，或是由于氧分子的顺磁性，促进了体系间跨越，使激发单重态的荧光分子转变至三重态；④浓度较大（超过1 g/L）时，还发生自熄灭现象。
荧光物质中引人荧光熄灭剂会使荧光分析产生误差，但是，如果一个荧光物质在加入某种熄灭剂后，荧光强度的减弱和荧光熄灭剂的浓度呈线性关系，则可以利用这一性质测定荧光熄灭剂的含量,这种方法称为荧光熄灭法（fluorescence quenching method）。如利用氧分子对硼酸根－二苯乙醇酮配合物的荧光熄灭效应，可进行微量氧的测定。