质粒dna提取三种方法

如何用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA?

如何用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA?

用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA:
提取液中加入等体积预冷的5mol/L Licl 充分混匀,1000rpm 4℃离心15min,取上清。
加等体积异丙醇,混匀,室温放置10min,10000rpm 4℃离心15min。
弃上清,纯点加入70%乙醇洗涤一次,沉淀风干10~15min。
500ul,含RNA酶的TE(pH8.0)溶解沉淀,室温放置30min。(将质粒RNaesA混合物用酚:氯仿抽提一次,然后用氯仿抽提一次)
用2.5倍体积无水乙醇沉淀质粒,风干10min。
加1ml灭菌水溶解沉淀,加500ul PEG-MgCl2溶液,充分混合,室温10min,12000rpm 4℃离心15min。
用70%乙醇重悬沉淀,12000rpm 4℃离心15min。
弃上清,沉淀用70%乙醇处理一次,最后将质粒,溶于500ulTE(pH8.0)中,取1ul质粒DNA,100倍稀释后测OD260,计算DNA的浓度,其余封装,-20℃保存备用。

如何将质粒dna和细胞染色体dna分开?

染色体DNA呈线性结构,而质粒DNA呈环状结构。因此,将总的DNA提取出来之后,跑电泳的话,由于它们各自的结构不一样,会很容易分开。一般情况下,质粒DNA比线粒体DNA要跑得快一些。

质粒DNA提取溶液I是什么颜色?

无色透明的.如果你加了lyseblue,可能会有乳白色的沉淀.而lyseblue在碱性pH下,也就是加入P2后,会呈现蓝色.

从细胞中提取质粒然后电泳,为什么一种质粒可以跑出两条带?

正常的现象,没有酶切过的质粒有两种形态,环形和超螺旋,超螺旋的跑在前,环形在后,不能用bp大小去衡量,只有线性化的才能通过普通的凝胶电泳区分大小。未知回答是否满意。

质粒的来源是什么?

质粒广泛存在于生物界,从细菌、放线菌、丝状真菌、大型真菌、酵母到植物,甚至人类机体中都含有,从分子组成看,有DNA 质粒,也有RNA 质粒,从分子构型看,有线型质粒、也有环状质粒,细菌质粒是基因工程中最常用的载体。
质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体或拟核以外的DNA分子,存在于细胞质中,具有自主复制能力,使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息,是闭合环状的双链DNA分子。