iptg诱导蛋白质表达的原理
低温诱导是几度？
低温诱导是几度？
降低温度指的是降低诱导的温度，当然是加IPTG之后换成低温，25度不算低了，呵呵，我们一般都用到16度，诱导时间要根据蛋白的特性来定，初次实验可以取不同时间段的样品收集起来跑胶检测，不过一般低温诱导时间比常温诱导要常一点，如果蛋白表达量本身很大的话当然3-4h足够了，如果蛋白在常温诱导下表达量也不是很高的话，可以考虑过夜诱导的，时间不是确定的，靠自己摸索。
重组蛋白的制备方法是什么？
在重组蛋白的生产中，常用的方法是将处于诱导型启动子的控制下的重组蛋白的表达盒导入宿主细胞中，并将该重组细胞导入培养用培养基中，培养后通过营养素的供给使该重组细胞增殖至所希望的浓度，根据启动子加入阿拉伯糖、乳糖或异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)等诱导剂，诱导重组蛋白的表达的方法。
蛋白表达诱导的时间和温度？
一般建议先进行小试，来确定最合适的条件。
在诱导时间上并不总是时间越长越好。尤其是对于宿主有毒性的蛋白。在诱导期间，我们需要每隔几个小时就进行取样检查目的蛋白的表达。
通常情况下，溶解度在较低的温度下可以得到增强。由于我们需要得到可溶性蛋白，以便进行下一步的纯化，所以可以尝试在30℃，25℃和18℃下进行诱导。
不同的蛋白进行诱导表达需要的时间和温度，还需要根据具体情况来进行确定。
酵母筛库原理？
根据载体 的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。
在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS)，它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。
这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。
由α-互补而产生的LacZ 细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。
这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。