制备感受态细胞的过程步骤
在制备感受态细胞，保存的时候用的甘油的浓度？以及加完甘油后最终的浓度？
在制备感受态细胞，保存的时候用的甘油的浓度？以及加完甘油后最终的浓度？
我们通常是配制80%的甘油，然后高压灭菌备用。用的时候，取一半甘油一半菌液即可，-80保存，复苏没有问题。甘油的终浓度是40%。
克隆感受态里面有启动子吗？
1,克隆的基因A要插入到带启动子的表达载体（质粒）里面构建重组质粒A-plasmid.
2,构建好的重组质粒A-plasmid转入到表达菌株（制备成感受态细胞）衍生菌株里面.
3,转化成功,挑单克隆诱导表达.
启动子的长度大约100-1000bp，位于目的基因的上游，是RNA聚合酶和转录因子的结合位点，因此，启动子在决定基因在何时何处开始表达上起了重要作用。
钙离子处理细胞的方法与感受态细胞法的区别？
将目的基因导入微生物细胞，应采用感受态细胞法（Ca2 处理法）
如何将一个质粒dna转入到大肠杆菌感受态细胞中？
不对,通过转化到感受态细菌中,不是细胞.感受态的大肠杆菌,可以自己制作也可以通过购买.之后将细菌凃到含有抗生素的板子上,长出克隆后挑取单克隆,将单克隆加入含有抗生素的细菌培养基中培养,之后提取质粒,提取质粒可以购买相应的试剂盒,按照试剂盒的说明书操作即可.质粒是带有抗性基因的,只有含有该质粒的细菌才能在含有对应抗生素的培养基中存活并增殖,这样就能确保是你的表达载体质粒.当然为了防止杂菌的污染,整个过程中最好是无菌操作.而表达载体质粒有可能出现突变等情况,所以可以在提出质粒之后,取少量质粒送测序,来确保序列的无误.
化转感受态和电转感受态？
两者原理不同，效果无明显区别，电击法处理的感受态细胞的原理是用瞬时高压处理细胞悬液，细胞膜在高压下去极化，产生微孔，变成感受态细胞。化学法是用低渗溶液处理细胞，使细胞膜结构发生变化。
感受态细胞的制备时有什么注意事项？
1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。
2、弃去上清,用预冷的0.05mol/l的cacl2溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。
3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/l的cacl2溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液。
4、感受态细胞分装成200μl的小份,贮存于-70℃可保存半年。