液相色谱峰有一些拖尾解决方法

高效液相色谱中理论塔板数的计算方法是什么?

高效液相色谱中理论塔板数的计算方法是什么?

色谱图最主要的几个参数:保留时间峰面积分离度拖尾因子理论塔板数
前面两个(保留时间Rt,峰面积A)可以直接得到;
分离度(resolution):表示两个相邻色谱峰的分离程度。计算公式:R2(Rt2-Rt1)/(W1 W2)
Rt1Rt2分别表示峰1峰2的保留时间,W1W2分别表示两峰的底峰宽,分离度R≥1.5 表示两峰完全分开。
拖尾因子:表示色谱峰的对称程度 T(拖尾因子)W0.05h/2d1
W0.05h为5%峰高处的峰宽,d1为峰顶点至峰前沿之间的距离
《中国药典》规定峰高法定量时T应该在0.95-1.05之间,低于0.95为前延峰,高于1.05为拖尾峰。
理论塔板数(theoreticalplatenumber),用于定量表示色谱柱的分离效率
理论塔板数5.54*(Rt/W0.5)^2 Rt为保留时间W0.5为半峰宽
也可以表示为:N16*(t/w)^2。其中,t是溶质从进样到最大洗脱峰出现的时间,w为该溶质的洗脱峰在基线处的宽度。

高效液相色谱仪中涉及到的对称因子的计算方式,具体点的?

对称因子没有详细要求,药典规定测定含量时,拖尾因子的范围是在0.95-1.05之间。
但是这个值真的很难做到。

高效液相,装流动相的瓶空了,泵还在动着,过了一夜,结果会怎样?

对柱子损坏极大!峰形拖尾是情理中的结果。 不过,如果是安捷伦厂家类的好柱子,有可能影响稍小, 我遇到过一次,同事操作流动相的瓶空了,泵还在动着,大约2小时, 峰形仍能保持正常。

影响高效液相峰形的因素?

首先确定进的是纯物质,把柱子重新连接一次,再进一次样,还是发现主峰分叉,估计是柱头塌陷了。不过柱头塌陷的话一般所出的每个峰都会有分叉现象,很容易辨别的。塌陷的柱子一般要换了,也可以修补,比较难,不做介绍了。峰型不对称原因比较多,一般理论板数和拖尾因子合格,都没什么影响。要解决它的话,找点专业的书看看吧。希望有用!

液相色谱中,调节流动相pH值能影响主峰色谱吸收吗?

在色谱柱耐受的范围内,流动相pH值的改变影响最大的是色谱峰的保留时间,保留时间改变进而峰形也随之改变。在反相色谱条件下,分析的物质在流动相中处于完全解离状态时,出峰最快;而处于全部非解离状态下,出峰最慢;有部分解离时,峰形应该是比较差的。
采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时,通过调节流动相的pH值,以抑制样品组分的解离,增加组分在固定相上的保留,并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸,流动相的pH值越小,组分的k值越大,当pH值远远小于弱酸会计考试的pKa值时,弱酸主要以分子形式存在;对弱碱,情况相反。分析弱酸样品时,通常在流动相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品时,通常在流动相中加入少量弱碱,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。
注:流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互作用,减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺(如三乙胺)又称为减尾剂或除尾剂。