洗脱剂的极性与洗脱顺序
为什么过硅胶柱要用大极性的洗脱剂？
为什么过硅胶柱要用大极性的洗脱剂？
因为根据物质结构相似性和相容性原理，极性物质溶解在极性溶剂中，极性溶剂容易取代吸附的物质。因此，极性组分只能用极性溶剂洗脱。如果使用低极性溶剂，则很难洗脱。
洗脱剂的主要作用是溶解性。如果极性组分和洗脱剂(溶剂)颗粒之间的相互作用类似于溶质颗粒和溶剂颗粒之间的相互作用，那么更多的将被溶解。这应该是相似溶解度定律的基础，但上述定律不方便判断。于是人们总结出一个简单的判断法则:相似相容法则通常被称为 "极性相似的两者有很大的互溶性
过柱子时为什么极性小的先下来,在用同一种洗脱剂时？
通过硅胶柱是基于吸附的原理。根据不同化合物与硅胶的结合能力不同，溶解度相近，小极性的化合物在小极性的洗脱液中分配系数较高，从而使不同极性的化合物通过逐渐增大的极性得以分离。
一般比例是要求跑板跑到中间时的极性，已经降低了5-10倍。根据点的距离，选择合适的渐变。
简述梯度洗脱程序的优点与操作步骤？
等度洗脱和梯度洗脱的优缺点
在液相色谱的分离条件中，重要的参数是洗脱条件，分离条件分为等度洗脱和梯度洗脱。
在同一分析周期内，梯度洗脱:按程序不断改变流动相的浓度比。
等溶意味着自始至终只使用相同的流动相。
是否使用梯度洗脱主要取决于杂质。同一物质有梯度和等度两个条件时，梯度较高。杂质与杂质、主峰、溶剂峰的分离度好(不好就要梯度)。
(1)杂质和主成分的极性相差很大，所以杂质要四周洗脱(有时杂质会 等度的情况下两三个小时洗不掉，所以一定要考虑等度)。
(2)杂质极性与主成分极性相差较大，杂质出峰太晚(等冲两小时可生成一个杂质，取样时间可梯度缩短)
(3)还有，杂质极性大于主峰，如果主峰时间合适，杂质堆积在前面，与主峰分离太晚，也要考虑梯度洗脱。
在色谱分析中，等度洗脱和梯度洗脱各有优缺点。
等稀释
优势
对于等度洗脱，由于方法运行时流动相比例不变，对仪器要求不高，所以需要一台单元泵来运行方法。
其次，由于等度洗脱条件单一，易于探索方法设置，如改变流动相比例和柱温等。
此外，因为等度洗脱的流动相比例在每次操作中是相同的，所以当以相同方法运行多个样品时，不需要设置样品之间的平衡时间来将系统恢复到所需的流动相比例。
劣势
但它也有一个缺点，就是出峰较晚的组分色谱峰较宽。
并且大多数等度洗脱方法方法分析需要很长时间。
梯度洗脱
也称为梯度洗脱或程序洗脱。
在气相色谱中，为了改善宽沸程样品的分离，缩短分析周期，一般采用程序升温的方法。在液相色谱中，梯度洗脱用于成分复杂的样品。在同一分析周期内，流动相的浓度比按程序连续变化，称为梯度洗脱。因此，一个复杂样品中不质的组分，按照各自合适的容量因子k，可以达到很好的分离目的。
优势
而梯度洗脱可以避免等度洗脱的问题，峰型变化几乎没有拖尾。比如梯度洗脱样品峰，无论是先出峰还是后出峰的组分，其峰形基本都能保持尖锐的对称性。
其次，由于梯度洗脱通常设定流动相比例，使洗脱强度越来越强，因此可以在短时间内保持，样品中强烈保留的组分也可以被洗脱。
劣势
但是，有了这些优点，也会有相应的缺点。首先，它需要更高的仪器配置，通常需要四元泵或二元泵。
其次，需要在每次样品运行之间设置一个平衡时间，以使系统中的流动相比例达到初始流动相比例。
之后，由于其方法设置复杂，如初始流动相比例、流动相梯度变化、终止流动相比例、柱温箱等，方法的开发和优化会更加复杂。但有时也会导致基线漂移。