primer默认的引物长度可以转变吗
DNA复制时的引物成分是什么？作用机理是什么？
DNA复制时的引物成分是什么？作用机理是什么？
DNA半保留复制：当DNA进行复制时，双螺旋结构解开成两条单链，各自作为模板合成与之互补的新链。在子代DNA双链中，一条是来自于亲代，另一条完全重新合成 。
DNA复制，需要许多相关的酶和蛋白因子参与。包括：①底物（substrate) ：dATP，dGTP，dCTP，dTTP；②DNA聚合酶(polymerase):依赖DNA的DNA聚合酶，简写为DNA-pol；③模板(template) ：解开成单链的DNA母链；④引物(primer) :一小段RNA；⑤其他的酶和蛋白质因子：DNA旋转酶, 解旋酶, DNA结合蛋白；引物酶；DNA连接酶。
参与DNA复制的DNA聚合酶，必须以一段具有3端自由羟基（3-OH）的RNA作为引物(primer) ，才能开始聚合子代DNA链。RNA引物的大小，通常为1－10个核苷酸。RNA引物的碱基顺序，与其模板DNA的碱基顺序相配对。
作用机理：在模板的复制起始部位催化NTP的聚合 , 形成短片段的RNA。这一小段RNA作为复制的引物（primer），提供3-OH末端，使DNA-pol能够催化dNTP聚合。引物酶与其他和复制有关的蛋白质形成的复合物。由此开始DNA的复制。
PCR的退火温度怎么设定？
PCR中退火的那步是引物与模板结合，一般来说，退火温度比Tm值要低上5度左右。另外，也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。但这些都不是绝对的。
你要是在他的推荐温度下没有目的条带，你可以试试做一个温度梯度，摸索一下退火温度。
怎样根据mRNA设计引物？
先找到基因的mRNAX序列。
引物设计参数：
a
引物长度一般在20bp左右，上下游引物碱基长度不要相差超过4个碱基。
b
引物退火温度一般在58度，不同软件TM使用不同的算法，primer3，primer
5，primer
6，primer
express等一般可以设置在55-58度，beacon
design可以设置在65左右。
c
GC含量一般没什么特殊要求，40-60最好，如果不好设计，30-80也是可以的。
d
产物长度在100-150,80-200也可以，不要在50bp左右，那样和引物二聚体不好区分，超过200bp可能会影响PCR扩增。
e
软件给出的引物不能有发卡结构和超过3-4个碱基的匹配，特别是3`端不能有碱基匹配，那样更容易形成二聚体。
f
引物设计好以后，在NCBI上做一个primer-blast，检测一下是否有非特异性扩增。