pda培养基的配制及灭菌过程
斜面的制备步骤？
斜面的制备步骤？
PDA培养基的配制及试管斜面制作
1.实验材料
1.1试剂材料
土豆，葡萄糖，琼脂，试管，试管架，天平，注射用硫酸链霉素，注射用青霉素钠，三角瓶，灭菌锅，电磁炉，超净工作台，烧杯，1mL移液器，培养皿
1.2PDA培养基配方
土豆（去皮）200g
葡萄糖20g
琼脂15-20g
蒸馏水1000mL
pH 自然
2.实验方法与步骤
2.1称量和熬煮
将土豆去皮，按自己所需的量（例如配制1L）称取土豆，将土豆切成小块放入锅内，加入适量的蒸馏水，在电磁炉上加热至沸腾，30min后用4层纱布在大量杯上过滤，弃掉滤渣，滤液用蒸馏水补足1L。
2.2溶解
用天平称取20g葡萄糖加入滤液中，用玻璃棒搅拌，使其完全溶解。
2.3分装
称取8-10g琼脂，加入所用三角瓶中，然后将滤液分装到三角瓶中，每瓶500mL，用玻璃棒将琼脂搅匀。
2.4加棉塞
培养基分装完毕后，在三角瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。
2.5包扎
加塞后，在棉塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。
2.6灭菌
将配制完成的培养基，包好的平板及其他所需用品一起放入灭菌锅灭菌（见灭菌锅使用方法）。
3.试管斜面制作方法与步骤
3.1前两步同2.1，2.1步骤
3.2加热溶解
量取500mL滤液到1000mL的烧杯中，再加入8-10g的琼脂，用玻璃棒搅匀，放入微波炉缓慢加热溶解，加热其间注意不要让培养基溢出烧杯，不时用玻璃棒搅拌。
3.3分装
等琼脂溶解后，将培养基分装到事先准备好的试管中。分装量约占试管高度的1/4，管口尽量不要沾染培养基。
3.4加塞
培养基分装完毕后，在试管口上塞上棉塞或橡胶塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。
3.5包扎
加塞后，试管7-9支捆用橡皮筋捆好，在塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。
3.6灭菌
将包好的试管和其他所需灭菌物品一同放入灭菌锅灭菌。
3.7摆斜面
灭菌完成后，将试管拿出，在超净工作台下摆成斜面，根据自己需要选择合适的倾斜度。
原基培养过程？
小川真等在试管中培养出松茸的原基。方法是取赤松林pH4.5的弱酸性土风干后，用2毫米孔目的筛子，筛后放入口径3厘米、长20厘米以上的试管中，装10厘米土，在2千克/平方厘米的压力下进行加热灭菌20分钟，冷却后分别再加入已灭菌的培养基组分。
将已培养的菌丝移入试管的土壤中，于23℃恒温下培养约2个月，可见到白色菌丝扩展，并开始旺盛生长时，把试管移到18℃的恒温箱中，在此温度下约15天，白色的菌丝块肥厚成球状，顶部变成褐色，可认为已形成松茸原基。这种菌丝块或原基的质地致密、多汁，有松茸香味，已可看到形成子实体的组织，直径5毫米左右。
原基和子实体均为组织化的菌丝体。在研究松茸菌丝体组织化的实验中，魏铁铮（1999）在1000毫升PDA培养基中加入1克、2克、3克一直到16克蛋白胨。结果发现，随着蛋白胨浓度梯度的变化，松茸菌落形态和组织化的程度成规律性的变化。在PDA培养基上，松茸菌丝为纯白色，菌落表面气生菌丝扭结，形成毛刺状。当蛋白胨含量为0.1%，菌丝仍为纯白色，菌落表面气生菌丝呈绒毛状，且不发生扭结。当蛋白胨含量为0.2%，菌落中央明显隆起，呈草帽状。表面气生菌丝长而多分枝，且旺盛致密。随着蛋白胨含量的增加菌落中央隆起越高，草帽状菌落外沿越来越窄，隆起部位颜色越来越深，气生菌丝逐渐变短。当蛋白胨含量达1.6%时，菌落呈半球形，颜色为浅黄褐色，组织化程度高，酷似松茸菌盖，半球直径可达15～20毫米。解剖观察，质地致密多汁，有浓郁的松茸香味，与小川真当年描述松茸原基一致，但原基直径明显大且具有可调控规律。