实时定量pcr原理和步骤
荧光定量pcr运行时高温什么,低温什么？
荧光定量pcr运行时高温什么,低温什么？
一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线,一般设定先94度几分钟,然后骤冷到65度（假定65度为退伙温度）.在65度时,pcr产物是以双链的形式存在的。 因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的,所以这个时候检测到很强的光信号,随着温度升高,双链逐渐打开,荧光信号逐渐减弱。
做实时定量PCR上下游引物能否先混一起后再加，影响结果不？
可以，hot start的步骤足够使之变性了
荧光定量PCR仪通道指的是什么？
channel指的是针对每一种荧光的检测器，比如你在一个管中做多个颜色，针对多个靶基因。每个颜色需要一个检测器来检测荧光信号的强弱，每一个针对不同颜色的检测器，就是一个通道
普通RT-PCR与实时荧光定量PCR的引物有什么区别？
普通RT-PCR是半定量的。。即需要从条带的亮度判断量的相对多少。。
荧光定量PCR是定量的。。
因为两者反应体系，要求有很大区别，引物通常不能通用。除了上面提到的荧光定量PCR产物要控制在60-200nt之间，退火温度也比较高。。一般要达到60度
荧光定量PCR技术有哪些优点呢？
荧光定量PCR与普通PCR相比具有以下优点：
1、高灵敏性 可检测单个细胞基因；
2、高特异性和精确性 将DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精准性融合，应用荧光探针和光电传导，直接探测基因扩增过程中荧光信号的变化，以获得定量结果，相当于在PCR反应过程中自动完成了Northern杂交；
3、操作简便、速度快 通过计算机和分析软件实现PCR扩增、产物检测和定量分析一体化；
4、安全、无污染 FQ-PCR在全封闭状态下进行PCR扩增和产物分析，杜绝了传统PCR开放检测对环境的污染和由此导致的假阳性；
5、结果观测重复性好 一起在线实时观测，结果判断直观，避免人为因素干扰。
实时荧光定量pcr中的绝对定量怎么做？
可以的。你把内参和目的基因都设成Unknown，然后输出数据，得到内参和目的基因的CT值。按照公式2-△△ct计算fold change就可以了。就是有点麻烦，得自己算。我也是用ABI7300绝对定量软件做的相对。