dna粗提取详细实验步骤 PCR技术只是对已有基因进行扩增，又怎么算是获取目的基因的方法？

dna粗提取详细实验步骤

PCR技术只是对已有基因进行扩增，又怎么算是获取目的基因的方法？

PCR技术只是对已有基因进行扩增，又怎么算是获取目的基因的方法？

PCR技术是DNA扩增技术，它能在比较短的时间内产生大量的DNA。在获取目的基因后才使用PCR技术。 获得目的基因的方法：
一、构建基因文库 提取总DNA。 用限制性内切酶将总DNA切成小片段，连到质粒或噬菌体载体上，把这些质粒转化到细菌，随着细菌繁殖而复制，这个过程又称为基因克隆（geneclone） 将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，便构成了该生物的基因文库（genelibrary）。
二、反转录人工合成互补DNA 细胞核中转录的mRNA，已经加工去除内含子，只有外显子（编码蛋白质的序列），比构建基因文库优越，因此，先从细胞中提取所需的mRNA。 以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成互补的DNA片段(complementaryDNA,cDNA)，在逆转录完成时，mRNA被降解。在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下，再以第一条DNA为模板，合成另一条互补DNA链。 优点在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA。因此，用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因。

DNA的粗提取和鉴定为什么要四次过滤？第四次过滤有什么用？

第一次过滤：过滤提取鸡血细胞核中的DNA(在滤液中),滤掉的是破碎的细胞结构（沉淀物）；
第二次过滤：过滤用2mol/L的NaCl充分溶解的DNA(在滤液中),滤去的是溶解度低的蛋白质等杂质（在沉淀物中）；
第三次过滤：过滤用0.14mol/L的NaCl析出的DNA（在沉淀物中）,滤去的是溶液中的杂质(在滤液中)；
第四次过滤：过滤再次用2mol/L的NaCl充分溶解的DNA(在滤液中),滤去的是溶解度低的蛋白质等杂质（在沉淀物中）；
第四次过滤进一步除杂并溶解DNA,为下一步用冷却的95酒精析出DNA做准备.

提取DNA时去除杂质的方法有哪些？

杂质：多酚类、糖类物质较多去除方法：材料粉碎后，在加细胞裂解液前，加入一些缓冲液清洗来除去多糖：缓冲液配比（100mmol/LTris－HCl，pH8.0；100mmol/LEDTA；250mmol/LNaCl；50ug/mL蛋白酶K；1％月桂酸钠Nalauroylsarcosine），50度保温过Rozman和Komel，1994，或者只用100mmol/LTris－HCl溶液清洗李晓波等，2002。去除多酚成分，可以添加Vc等抗氧化剂（参考浓度30～60mmol/L）胡春根等，1998和PVP、PEG等酚的结合剂，防止酚类与DNA的结合。