鉴定细胞凋亡的常用方法

tunel与dapi染色原理?

tunel与dapi染色原理?

tunel染色原理 细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
DAPI染色原理,它 是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处,一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍,常用与荧光显微镜观测,根据荧光的强度可以确定DNA的量。

流式细胞仪检测细胞凋亡(双染色法)实验步骤谁能介绍下?

最常用的是annexinv/pi双染检测凋亡,凋亡的细胞膜上的ps(磷脂酰丝氨酸蛋白)会从膜内转移到膜外,我们利用annexinv抗体即可与之结合,有结和得说明这个细胞有凋亡,pi是用来区分死活细胞的,一般认为annexinv阳性,pi阴性的那群细胞即为早期凋亡细胞。

流式细胞仪细胞凋亡的结果怎么分析?

如果是实验的话可以用PI等专门染活细胞或死细胞的染料进行染色,再用荧光显微镜或者流式细胞仪测量,原理一般是细胞膜的渗透性(比如死细胞一般细胞膜很通透,PI就会透过进行染色,活细胞则不会)。还有其他的一些染料则是测细胞凋亡的标志物(比如caspase含量)。
如果是只能在显微镜下观察判断的话,对于贴壁的细胞可以观察它是否贴壁以及它的形态(比如凋亡会有起泡,blob),但是这种方法非常不准确。。